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ELISA實驗要點:ELISA實驗過程中會遇到哪些問題,如何解決

更新時間:2023-12-11    點擊次數(shù):534

  標(biāo)簽:ELISA 本生 試劑盒 抗原 抗體 酶標(biāo)記抗體


  ELISA實驗要點:ELISA實驗過程中會遇到哪些問題,如何解決!

  高背景信號:

  可能原因

  洗板不充分;  樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中含干擾物;  緩沖液受污染;

  解決方法

  將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  確保在洗滌前棄掉了所有殘留抗體溶液;  設(shè)置空白對照;  重新配制緩沖液;

  無型號:

  可能原因

  試劑添加順序錯誤或試劑配制有誤;  HRP被疊氮化合物污染;  抗體用量不足;

  解決方法

  重復(fù)實驗;  檢查試劑配制方法;  復(fù)核試驗試劑添加流程;  使用新鮮配制的試劑;  使用推薦的抗體量;

  整版呈規(guī)則藍(lán)色:

  可能原因

  洗板不充分或跳過洗板步驟未去除殘留的非結(jié)合過氧化物酶;  封板膠紙或試劑儲液槽重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染;  緩沖液有金屬或HRP污染;

  解決方法

  嚴(yán)格按照說明書洗滌流程操作;  每步均需使用新的封板膜或試劑儲液槽;  配制新鮮緩沖液;

  標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳梯度不明顯:

  可能原因

  實驗操作流程有誤  標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋計算錯誤;

  解決方法

  嚴(yán)格按照說明書操作流程;  重新計算制作新的標(biāo)準(zhǔn)曲線;

  板內(nèi)重復(fù)性差:

  可能原因

  洗板不充分;  重復(fù)使用封板膠紙;  未使用封板膠紙;

  解決方法

  將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  每步均需更換使用新的封板膠紙;  需使用封板膠紙;

  板間重復(fù)性差:

  可能原因

  洗板不充分;  孵育溫度發(fā)生變化;  操作流程改變;  封板膠紙重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染;

  解決方法

  將洗滌緩沖液加入孔中洗滌,確保洗滌充分;  確保已在洗滌前棄掉所有殘留溶液;  嚴(yán)格按照推薦的溫度孵育;  勿在環(huán)境溫度變化大的地方孵育;  嚴(yán)格按照相同的操作流程;  每一步均使用新的封板膠紙;

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