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本生快訊——ELISA試劑盒規(guī)范曲線的制作關鍵簡述

更新時間:2023-03-31    點擊次數(shù):726

  本生快訊——ELISA試劑盒規(guī)范曲線的制作關鍵簡述


  很多試劑檢查都涉及到規(guī)范曲線的疑問,ELISA試劑盒規(guī)范曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果,乃至關系到試驗的成敗,那么究竟怎么繪制或制造規(guī)范曲線呢?下面本生技術小編詳解如下:

  一、做規(guī)范曲線樣品檢查時有幾個疑問需要注意

  1、樣品的濃度等目標是依據(jù)規(guī)范曲線計算出來的,所以首先要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事,不然后邊的試驗成果無從談起。

  2、設置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個對比大的跨度,而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模以內,人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規(guī)范曲線,盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度最陡段,即曲線簡直成直線的規(guī)模內。

  3、選用倍比稀釋法制造規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度,這么就能夠確保規(guī)范樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的違背。

  4、檢查規(guī)范樣品時,應按濃度遞加順序進行,以削減高濃度對低濃度的影響。

  5、規(guī)范曲線的樣品數(shù)通常為7個點,但最少要確保有5個點。

  6、做出的規(guī)范曲線相數(shù)因試驗要求不一樣而有所變化,但通常來說,相數(shù)R最少要大于0.98,對于有些試驗,最少要0.99乃至是0.999.

  二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合

  在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程的擬合,中低濃度部分能夠用直線方程,中心部分可用對數(shù)方程,而中后段可用四參數(shù)。免疫檢查時標準點(能夠是倍比稀釋的,也能夠不是)濃度假設和相應的吸光度(OD)值假設能夠出現(xiàn)直線當然是最抱負的了,這時能夠經(jīng)過EXELL等利便的取得擬合曲線,進而推算出樣品的濃度值。

  對于標準曲線的擬合辦法,直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學反響中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部分,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內,Logistic應當都能擬合得較為抱負。假設用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是對比好的,而兩真?zhèn)€平整部分計算誤差會大,有時乃至會很大。用于免疫檢查的所謂“標準曲線"真實稱為擬合曲線對比適宜?,F(xiàn)在國際上最盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合",用這種擬合辦法通常能夠對比的反映濃度和吸光度的曲線,從而進一步對比的取得樣品中待測物質的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這么抱負的情況,標品濃度和相應OD值通常是"S"型的曲線,這時就不能用直線擬合的辦法了,而對擬合辦法進行挑選即是必要的了。

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