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Elisa實(shí)驗(yàn):間接Elisa法的原理和適用范圍

更新時間:2024-09-27    點(diǎn)擊次數(shù):2390

  Elisa實(shí)驗(yàn):間接Elisa法的原理和適用范圍

‌間接ELISA法‌是一種常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法,屬于非競爭結(jié)合試驗(yàn)。其基本原理是將抗原連接到固相載體上,樣品中的待測抗體與之結(jié)合形成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物。隨后,使用酶標(biāo)記的二抗(針對受檢抗體的抗體)與固相免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合,形成固相抗原-受檢抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。通過目測或使用分光光度計定量測定加底物后的顯色程度,從而確定待測抗體的含量。這種方法不僅適用于定性檢測抗體的存在與否,還能進(jìn)行定量測量,即測定抗體的濃度。

間接ELISA法的試驗(yàn)步驟通常包括以下幾個階段:

‌抗原包被‌:將抗原在不損壞其免疫活性的條件下預(yù)先結(jié)合到固相載體表面。

‌洗滌封閉‌:通過洗滌去除未結(jié)合的抗原,并封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

‌加待檢血清‌:加入待檢測的血清樣本。

‌反應(yīng)一定時間‌:讓抗原與血清中的抗體進(jìn)行反應(yīng)。

‌洗滌‌:去除未結(jié)合的血清成分。

‌加酶標(biāo)二抗‌:加入針對受檢抗體的酶標(biāo)記二抗。

‌加底物溶液‌:加入酶作用的底物溶液,酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)。

‌終止反應(yīng)‌:通過加入終止液來停止反應(yīng)。

‌判定結(jié)果‌:通過肉眼觀察或儀器測定,根據(jù)顏色深淺或其他指標(biāo)判定結(jié)果。

間接ELISA法的適用范圍非常廣泛,包括但不限于:

醫(yī)學(xué)診斷:檢測血液、體液中的抗體,如傳染病抗體、自身免疫性疾病抗體等。

生物學(xué)研究:檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的抗體,用于研究細(xì)胞免疫反應(yīng)等。

食品安全檢測:檢測食品中可能存在的病原體抗體,確保食品安全。

環(huán)境監(jiān)測:檢測環(huán)境樣本中的抗體,評估環(huán)境污染對生物體的影響等。

總之,間接ELISA法通過其簡單、快速、靈敏的特點(diǎn),在多個領(lǐng)域中發(fā)揮著重要作用,為科研和臨床提供了重要的技術(shù)支持‌。

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