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基底膠的應用及使用方法

更新時間:2024-09-06    點擊次數(shù):534

  基底膠的應用及使用方法

  基底膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì),其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白,還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下,基底膠聚合形成具有生物學活性的三維基質(zhì),模擬體內(nèi)細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能,有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化,可用于對細胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達等的研究。

  基底膠的使用方法:

  1、培養(yǎng)細胞時可無需稀釋直接包被,包被厚度可為0.5 mm(薄層)或1.0 mm(厚層)。Matrigel也可以在無血清培養(yǎng)基中稀釋后用于包被培養(yǎng)器皿表面,根據(jù)細胞類型和應用目的確定相應Matrigel濃度。

  2、Matrigel在10℃以上即可成膠,在操作過程中,保持Matrigel一直置于冰上,所有接觸Matrigel的細胞培養(yǎng)器皿,移液吸頭,分裝管等都必須預冷后使用。

  3、Matrigel基質(zhì)會有色差變化(淡黃色到深紅色),是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2 作用引起的,與5%CO2 平衡后色差即會減少。凍融后,輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel 分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境下進行,試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭,并自然干燥。應使用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。

  4、解時可將Matrigel 基質(zhì)置于4℃冰箱內(nèi)冰上過夜溶解。成膠后的Matrigel可以在4℃ 24-48h后重新呈液態(tài)。

  基底膠的應用:

  基底膠可形成的三維培養(yǎng)基質(zhì),可促進上皮細胞、肝細胞、Sertoli細胞、黑色素瘤細胞、血管內(nèi)皮細胞、甲狀腺細胞及毛囊細胞等的貼壁與分化。同時,基底膠還能影響乳腺上皮細胞的蛋白表達,支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細胞的分化。不同配方的基底膠可以滿足不同的實驗要求。

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