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知識(shí)問答:ELISA中常見的假陰性的因素

更新時(shí)間:2024-08-20    點(diǎn)擊次數(shù):1883

  ELISA中常見的假陰性的因素

在ELISA實(shí)驗(yàn)中,假陰性的常見原因主要包括內(nèi)源性因素、外源性因素、操作因素和試劑盒自身因素。為了減少假陰性的發(fā)生,需要從多個(gè)方面進(jìn)行預(yù)防和解決。

內(nèi)源性因素

基因突變:個(gè)別個(gè)體的基因突變可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果為假陰性,尤其是當(dāng)檢測(cè)用抗體的結(jié)合位點(diǎn)在突變區(qū)時(shí)。

待檢物含量偏低:樣本內(nèi)被測(cè)物的濃度較低,易造成假陰性結(jié)果,如某些疾病發(fā)展初期被檢物濃度低于檢測(cè)限。

外源性因素

樣品反復(fù)凍融:血清樣品的反復(fù)凍融會(huì)使血清中的抗體效價(jià)下降,造成假陰性出現(xiàn)。

樣品處理不當(dāng):標(biāo)本用肝素或EDTA等抗凝劑處理,高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷,能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫,導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

樣品存放不當(dāng):標(biāo)本放置時(shí)間過長(zhǎng),抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。

操作因素

加樣不準(zhǔn)確:樣品稀釋液多加或血清少加,會(huì)降低血清中待檢IgG的吸附性,導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

洗滌不當(dāng):洗滌條件一致性較差或洗滌機(jī)使用不當(dāng),血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易造成“花板”,導(dǎo)致假陽性或假陰性。

孵育問題:溫箱調(diào)溫器異常使溫箱溫度降低或孵育時(shí)反復(fù)打開溫箱門,造成孵育時(shí)反應(yīng)不充分,出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

試劑盒自身因素

試劑盒敏感性:某些廠家為了提高檢測(cè)的特異性,會(huì)降低試劑盒的敏感性,從而造成在檢測(cè)過程中假陰性的出現(xiàn)。

為了減少ELISA實(shí)驗(yàn)中的假陰性,需要從標(biāo)本采集、處理、保存到實(shí)驗(yàn)操作和試劑盒選擇等多個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格控制和管理。這包括優(yōu)化標(biāo)本處理流程、提高操作一致性、選擇高質(zhì)量的試劑盒等措施。通過這些措施,可以有效降低ELISA實(shí)驗(yàn)中假陰性的發(fā)生率,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。x

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