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單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒實驗原理及操作步驟

更新時間:2024-01-23    點擊次數(shù):751

  單胺氧化酶(MAO)活性檢測試劑盒實驗原理及操作步驟


  有效期:6個月

  儲存條件:2-8℃

  推薦:若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602

  英文名稱:Monoamine Oxidase(MAO)Activity Assay Kit

  別名:單胺氧化酶試劑盒 單胺氧化酶測試盒

  檢測方法:微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

  注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

  規(guī)格:100T/96S

  MAO(EC1.4.3.4)包括MAO-A和MAO-B,是一種結(jié)合在線粒體外膜上的黃素蛋白,可催化神經(jīng)遞質(zhì)和生物胺氧化脫氨。單胺氧化酶與機體老化有關(guān),被認為是衰老的標志,其主要存在于脊椎動物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能。

  MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進一步氧化成酸,底物在360nm處有特征吸收峰,通過測定360nm處光吸收下降的速率,可計算MAO活性。

  若使用96孔板測定,需使用96孔UV板

  產(chǎn)品說明:

  MAO(EC1.4.3.4)包括 MAO-A 和 MAO-B,是一種結(jié)合在線粒體外膜上的黃素蛋白,可催化神經(jīng)遞質(zhì)和生物胺氧化脫氨。單胺氧化酶與機體老化有關(guān),被認為是衰老的標志,其主要存在于脊椎動物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能。

  MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進一步氧化成酸,底物在 360nm 處有特征吸收峰,通過測定 360nm處光吸收下降的速率,可計算 MAO 活性。

  Monoamine Substrate(360nm) Acids

  注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

  需自備的儀器和用品:

  紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、震蕩儀、蒸餾水。

  操作步驟:

  一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

  1、 臨用前根據(jù)實驗用量取出部分提取液一、提取液二和試劑一置于 4℃預冷 30min。

  2、 組織樣本:按照樣本質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿;1000g 4℃離心 10min,取上清,將上清液轉(zhuǎn)移至預冷的離心管,于 10000g,4℃離心 30min。棄上清,沉淀中加入 1mL 預冷的提取液二,振蕩混勻,于 16000g,4℃離心 40min,棄上清,加入 1mL 試劑一,振蕩混勻,置冰上待測。

  3、 細菌或細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取液一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一)加入提取液一,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間 3min),1000g,4℃離心 10min,取上清,將上清液轉(zhuǎn)移至預冷的離心管,于 10000g,4℃離心 30min。棄上清,沉淀中加入 1mL 預冷的提取液二,振蕩混勻,于 16000g,4℃離心 40min,棄上清,沉淀中加入 1mL 試劑一,振蕩混勻,置冰上待測。

  4、 血清(漿)或液體樣本:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。

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