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人活性氧 (ROS) 酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

更新時間:2023-09-11    點擊次數:2303

活性氧 (ROS) 酶聯免疫分析試劑盒使用說明書


  本試劑盒僅供研究使用。


檢測范圍:0.3ng/mL - 8ng/mL


  規(guī)格:96T  48T 

  貨號:BS-9689-A   BS-9689-B


使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中活性氧 (ROS) 含量。

驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人活性氧(ROS)水平。用純化的人活性氧(ROS) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧 (ROS),再與 HRP  標記的活性氧 (ROS) 抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏 色的深淺和樣品中的活性氧 (ROS) 呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度 (OD  ),通過標準曲線計算樣品中人活性氧 (ROS) 濃度。

試劑盒組成:

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

標試劑

6ml×1

8

準品 (16ng/mL)

0.5ml×1

3

標包被板

12 孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑 B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求:

1 .標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的 (HRP) 活性。

操作步驟:

1.     標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 。

8ng/mL

5 號標準品

150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

4ng/mL

4 號標準品

150μl 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2ng/mL

3 號標準品

150μl 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

1ng/mL

2 號標準品

150μl 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

0.5ng/mL

1 號標準品

150μl 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.     加樣:分別設空白孔 (空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,


然后再加待測樣品 10μl  (樣品最終稀釋度為 5 ) 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.     溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。

6.     加酶:每孔加入酶標試劑 50μl ,空白孔除外。

7.     溫育:操作同 3。

8.     洗滌:操作同 5。

9.     顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl ,再加入顯色劑 B50μl ,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10.   終止:每孔加終止液 50μl ,終止反應 (此時藍色立轉黃色)。

11.   測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度 (OD ) 。  測定應在終止

液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結

操作程序總結:.png


計算:

標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,為樣品的實際濃度。

注意事項

1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。

     2 .濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3 .各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4  請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高 (樣本 OD 大于標準品孔第一孔的OD ),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數 (n ) 后再測定,計 算時請最后乘以總稀釋倍數 ( ×n×5)。

    5  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6 .底物請避光保存。

   7 .嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

   8 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9 .本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1 .試劑盒保存:;2-8℃。

2 .有效期:6 個月

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