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人白介素12(IL-12)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

更新時(shí)間:2022-01-24    點(diǎn)擊次數(shù):1366

人白介素12(IL-12)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
 

本試劑盒僅供研究使用

檢測(cè)范圍: 96T

1 ng/L -60 ng/L

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素 12(IL-12)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白介素 12(IL-12)水平。用純化的人白介素12(IL-12)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素 12(IL-12), 再與 HRP 標(biāo)記的白介素 12(IL-12)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素 12(IL-12)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測(cè)定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白介素 12(IL-12)濃度。

試劑盒組成:

試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存

說明書1 份1 份

封板膜2 片(48)2 片(96)

密封袋1 個(gè)1 個(gè)

酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

酶標(biāo)試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存

人白介素12(IL-12)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

標(biāo)本要求

1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

60 ng/L5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30 ng/L4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15 ng/L3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5 ng/L2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3.75 ng/L1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

然后再加待測(cè)樣品 10µl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié):

 

 

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實(shí)際濃度。

人試劑盒白介素12(IL-12)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間建議控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,建議做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。

7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存:;2-8℃。

2. 有效期:6 個(gè)月

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