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操作Elisa試劑盒的實驗需注意哪些事項

更新時間:2021-08-26    點擊次數(shù):975
   ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來,得到科研工作者的認可及推崇,在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。免疫吸附試驗(也叫ELISA試劑盒實驗) 因其操作簡單,靈敏度高,特異性好,經(jīng)濟安全等特點所以在科研界被廣泛應用,又因為其操作步驟復雜,一般包括試劑準備,樣本收集,加樣,溫育,洗滌,顯色,比色,結(jié)果判定等,其中任何一項操作不當都會對檢測結(jié)果產(chǎn)生很大影響。所以必須加強ELISA檢測的全面質(zhì)量控制,保證其結(jié)果的準確可靠。
  Elisa實驗結(jié)果的影響因素包括檢測樣品因素、操作因素等。在實驗操作的過程中有一些注意事項。下面為大家分享操作Elisa試劑盒的實驗需注意哪些事項(供參考):
  1、加樣后及時放人孵箱,標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。
  2、作時必須戴手套,穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
  3、剩余樣品及廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
  4、同批號試劑組分不得混用。
  5、洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
  6、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
  7、要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應該將其最高量程和zui低量程進行確定。
  8、在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標準品溶液。
  9、吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準確。
  10、手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15~30s,不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中,防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。
  11、底物為TMB,避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應盡量避免接觸皮膚。
  ELISA檢測操作步驟較為復雜,影響測定結(jié)果的因素的原因也較多,分布在測定操作的各個步驟中,因此必須加強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準確可靠的檢測結(jié)果。

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